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外周血單個(gè)核細(xì)胞分離

 

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人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離自外周血。外周血單個(gè)核細(xì)胞( PBMC )即外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。

 

外周血中單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的比重介于1.075～1.090之間，紅細(xì)胞及粒細(xì)胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之間，因而可利用一種比重介于1.075～1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心，使一定比重的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布而加以分離。

 

對(duì)分離介質(zhì)的基本要求是：

 

①對(duì)細(xì)胞無毒；

 

②基本等滲；

 

③不溶于血漿及分離物質(zhì)；

 

④有特定的比重。

 

Ficoll分離液（2份6%聚蔗糖蒸餾水溶液與1份34%泛影葡胺生理鹽水溶液混合）為常規(guī)的淋巴細(xì)胞分離液，其比重為1.077 ±0.002，主要用于分離外周血中單個(gè)核細(xì)胞。

 

分離步驟

1、取新鮮抗凝全血，15ml離心管

2、在離心管中加入適量分離液，1:1稀釋成10ml溶液。

3、將試管放入可成低速離心機(jī)中，水平轉(zhuǎn)子800xg，離心20min

 

離心后將出現(xiàn)明顯的分層:最上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為單個(gè)核細(xì)胞層，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。

 

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